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美國NanoView公司所開發的全自動外泌體熒光檢測分析系統是一款無需純化的、全自動的可對單個外泌體進行表征分析的全新設備。該設備能夠提供全方位的外泌體表征信息，包括外泌體粒徑大小、計數、分布、攜帶蛋白表達、生物標志物（CD9，CD81，CD63等）共定位等。操作簡單，結果可靠。一經推出，便引起了外泌體領域科研工作者的廣泛關注，短短兩年時間在全球已有50多個實驗室采用該技術，發表重要文獻近百篇。
全自動外泌體熒光檢測分析系統的基本原理是一種基于特異性免疫捕獲技術，允許研究者直接分析特定群體的外泌體或外囊泡。通過配套的試劑盒，客戶一次性能夠分析多達9個不同的樣本，大大節省了時間和經濟成本。全自動外泌體熒光檢測分析系統兼容各種生物樣本，除了純化的外泌體之外，對于血液、尿液、惡性腫瘤、腹水中的外泌體也可直接檢測分析，大大拓展了研究范圍。
應用方向及主要特征
生物標記物共定位 可量化4種標記物的表達情況 | 計數分析 直接從樣品中計算抗原陽性外泌體的數量，無需提純 |
粒徑分析 高精度統計外泌體的顆粒大小及分布 | 檢測外泌體內容物 使用ExoView Cargo試劑盒可探測外泌體內部核酸的裝載情況，分析裝載率 |
熒光檢測 具備3個熒光通道，能夠探測單個蛋白的結合 | 線性工作流程 9個樣品的全自動分析 |
無須純化 無需擔心純化帶來的誤差，更精確的測量樣品間的表征和表達信息的差異 | 多重樣本分析 可使用6種表面標記物來篩選外泌體 |
粒徑分析
全自動外泌體熒光檢測分析系統能夠對>50 nm的外泌體進行全方面的表征，無論是粒徑尺寸、粒徑分布還是外泌體的亞型均可在一次測試中得到。并且所用來測試的樣本無需進行純化，避免因純化帶來的樣本偏差。
分析不同大小和不同尺度的外泌體亞群，在CD171過表達系統中，100 nm以上的外泌體僅表達了CD171。
量化外泌體亞群
通過抗體捕獲的模式，全自動外泌體熒光檢測分析系統能夠量化含有不同標記物的外泌體亞群，并對不同種群的外泌體進行特異性計數和分析。整個過程無需純化，并且線性范圍可跨越3個數量級。
TSPAN8陽性細胞外囊泡的稀釋曲線。使用1:3比例的梯度稀釋。用R2 = 0.9986計算與TSPAN8熒光數據的線性擬合。
檢測外囊泡中的裝載物
MISEV建議在表征外泌體和外囊泡時，應當同時測量表面和載體蛋白。使用ExoView芯片可穿透外泌體，探測膜內蛋白和載體。并且單次可定量3種表面、管腔蛋白。
檢測細胞外泌體內的Syntenin。
WT細胞在未穿膜的條件下幾乎觀測不到Syntenin的信號。進行穿膜處理后可以觀測到Syntenin信號，而KO之后信號消失
生物標志物共定位
全自動外泌體熒光檢測分析系統能夠在單個外泌體樣本上檢測多達4種標記物，并同時提供外泌體的其它表征數據諸如計數、顆粒尺寸統計等。
無需純化
全自動外泌體熒光檢測分析系統只測量含有靶標抗原的特定細胞外泌體群體。僅需35ul的稀釋樣品，即可直接獲得外泌體的表型、l粒徑和計數信息。并且無需擔心污染物對測試的影響。
無論純化與否，Exoview均可進行分析
ExoView™ Kit 配置清單:
ExoView™ Tetraspanin Kits | CD9 - 捕獲抗體 CD63 - 捕獲抗體 CD81 - 捕獲抗體 Mouse IgG 陰性對照 CD9、CD63、CD81三色共標記熒光抗體。 |
ExoView™ Tetraspanin Plasma Kits | CD9 - 捕獲抗體 CD63 - 捕獲抗體 CD81 - 捕獲抗體 CD41a - 捕獲抗體 多達三種定制化捕獲抗體 同種陰性對照 CD9、CD63、CD81三色共標記熒光抗體。 |
ExoView™ Tetraspanin Custom Kits | CD9 - 捕獲抗體 CD63 - 捕獲抗體 CD81 - 捕獲抗體 多達三種定制化捕獲抗體 同種陰性對照 CD9、CD63、CD81三色共標記熒光抗體。 |
ExoView™ Cargo Kits | 兼容所有ExoView Kit 標準 CD9， CD63和CD81 捕獲抗體 Mouse IgG 陰性對照 ExoView Cargo 試劑 CD9、CD63、CD81三色共標記熒光抗體。 Sytenin熒光抗體 |
發表文章
2020年已發表文獻
1. Cytokine profiling in serum-derived exosomes isolated by different methods， Jung HH， Kim JY， Lim JE， Im YH， Nature Scientific Reports 2020
2. Study of immune-tolerized cell lines and extracellular vesicles inductive environment promoting continuous expression and secretion of HLA-G from semiallograft immune tolerance during pregnancy， Cho K， Kook H， Kang S Lee J， JEV 2020
3. Annexin A1–dependent tethering promotes extracellular vesicle aggregation revealed with single–extracellular vesicle analysis， Rogers MA， Buffolo F， Schlotter F， Atkins SK， Lee LH， Halu A， Blaser MC， Tsolaki E Higashi H， Luther K， Daaboul G， Bouten CVC， Body SC， Singh SA， Bertazzo S， Libby P， Aikawa M， Aikawa E， Cell Biology 2020
4. Targeting tumor-derived exosomes using a lectin affinity hemofiltration device， Marleau AM， Jacobs MT， Gruber N， Rodell TC， Ferrone S， Whiteside TL， Cancer Research2020
5. Extracellular Vesicle and Particle Biomarkers DefineMultiple Human Cancers. Hoshino A， Kim HS， Bojmar L， Gyan KE， Cioffi M， Hernandez J， Zambirinis CP， Rodriques G， Molina H， Heissel S， Mark MT， Steiner L， Benito Martin A， Lucotti S， Di Giannatale A， Offer K， Nakajima M， Williams C， Lyden D.， Cell 2020
6. Reporter mice for isolating and auditing cell type‐specific extracellular vesicles in vivo， McCann JV， Bischoff SR， Zhang Y， Cowley DO， Sanchez-Gonzalez V， Daaboul GG， Dudley AC， Genesis2020
7. High yield and scalable EV production from suspension cells triggered by turbulence in a bioreactor， Grainger A， Wilhelm C， Gazeuah F， Silva A， Cytotherapy 2020
8. Extracellular Vesicles: A New Frontier for Research in Acute Respiratory Distress Syndrome， Mahida RY， Matsumoto S， Matthay MA. American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology2020
9. Small extracellular vesicles modulated by αVβ3 integrin induce neuroendocrine differentiation in recipient cancer cells， Quaglia F， Krishn SR， Daaboul GG， Sarker S， Pippa R， Domingo-Domenech J， Kumar G， Fortina P， McCue P， Kelly WK， Beltran H， Liu Q， Languino LR.， Journal of Extracellular Vesicles， Volume 9， Issue 1， 2020
10. Characterisation of extracellular vesicles surface markers and co-expression studies with single particle interferometric imaging platform， Kusuma G， Lim R.， Cytotherapy， Volume 22， Issue 5， 2020
11. Engineering mesenchymal stem cell paracrine activity with 3D culture， Kusuma G， LiA， Zhu D， McDonald H， Chmabers D， Frith J， Lim R.，Cytotherapy， Volume 22， Issue 5， 2020
12. Release of extracellular vesicle miR-494-3p by ARPE-19 cells with impaired mitochondria，Ahn JY， Datta S， Cano M， Mallick E， Rai U， Powell B， Tian J， Witwer KW， Handa JT， Paulaitis ME.，Biochim Biophys Acta Gen Subj. 2020 Mar 30:129598. (doi: 10.1016/j.bbagen.2020.129598)
13. Advantageous Antibody Microarray Fabrication Through DNA-Directed Immobilization: A Step Toward Use of Extracellular Vesicles in Diagnostics， Brambila D， Sola L， Chiari M.， Talanta 2020
15. Membrane-Binding Peptides for Extracellular Vesicles On-Chip Analysis， Gori A， Romanato A， Bergamaschi G， Strada A， Gagni P， Frigerio R， Brambilla D， Vago R， Galbiati S， PIcciolini S， Bedoni M， Daaboul G， Chiari M， Cretich M.， Journal of Extracellular Vesicles， Volume 9， Issue 1， 2020
16. Subpopulations of extracellular vesicles from human metastatic melanoma tissue identified by quantitative proteomics after optimized isolation， Crescitelli R， L?sser C， Jang SC， Cvjetkovic A， Malmh?ll C， Karimi N， H??g JL， Johansson I， Fuchs J， Thorsell A， Gho YS， Bagge RO， L?tvall J， Journal of Extracellular Vesicles， 2020
17. Extracellular Vesicles Derived from Induced Pluripotent Stem Cells Promote Renoprotection in Acute Kidney Injury Model， Collino F， Lopes JA， Tapparo M， Tortelote GG， Kasai-Brunswick TH， Lopes GMC， Almeida DB， Skovronova R， Wendt CHC， de Miranda K， Bussolati B， Vieyra A， Soares Lindoso R.， Cells， 2020
18. Extracellular Vesicles: A New Frontier for Research in Acute Respiratory Distress Syndrome，Mahida RY， Matsumoto S， Matthay MA. American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology， 2020
19. Exosomes A clinical COmpendium - Methods for exosome isolation and characterization，Zhou M， Weber SR， Zhao Y， Chan H， Sundstrom JM. Exosomes A Clinical Compendium 2020
20. Phenotypic analysis of extracellular vesicles: a review on the applications of fluorescence，Panagopoulou MS， Wark AW， Birch DJS， Gregory CD. Journal of Extracellular Vesicles， 2020
21. Immune Cell-Derived Exosomes in the Cancer-Immunity Cycle Yan W， Jiang S， Trends in Cancer 2020
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如何使用全自動外泌體熒光檢測分析系統ExoView進行外泌體測量？
