亚洲a级网站_国产女极品在线观看AV_9色视频在线观看_欧美一区日本一区韩国一区_三级高清自拍少妇_国一区二区

表面等離子共振顯微鏡SPRm 200

2017年R&D100獲獎產(chǎn)品

表面等離子體共振(SPR)是一種廣泛用于研究生物分子結(jié)合的免標記檢測技術(shù)。 從90 年代商品化以來，SPR 在儀器的發(fā)展和應(yīng)用層面上已日臻完善，并成為在生物醫(yī)學(xué)、傳感器研發(fā)、藥物開發(fā)等領(lǐng)域的關(guān)鍵技術(shù)之一。近年來與SPR 相關(guān)的*重大的突破就是表面等離子體共振顯微鏡技術(shù)（SPRM）的出現(xiàn)。 SPRM 將高分辨顯微鏡成像與表面等離子體共振相結(jié)合，充分利用了前者的空間成像和后者實時測量親和力和動力學(xué)的功能。用傳統(tǒng)的SPR 研究膜蛋白和待篩選的藥物和其他配體的相互作用是有難度的，這是因為傳統(tǒng)方法需要繁瑣地提取細胞中的蛋白，并將純化過的蛋白固定在芯片表面。 這樣多步的程序不但耗費人力，而且改變了蛋白在細胞膜中所處的環(huán)境。SPRM 由于可以直接在芯片上固定或培養(yǎng)細胞，因此可以無需提取細胞中的蛋白，就可在原位研究其結(jié)合過程。另外，每一細胞上膜蛋白局部和整體的結(jié)合都可以測定和觀察到。

SPRM 模式 (高分辨顯微技術(shù)) 集成光學(xué)顯微鏡與SPR技術(shù)

SPRM 是一種基于高分辨成像技術(shù)的SPR 檢測模式。它同時對芯片表面提供明場光學(xué)圖像和親和力和動力學(xué)常數(shù)。獲得的圖像中的每個像素都可提供一個傳感譜圖，因此可以對芯片表面的各個微小區(qū)域的分子結(jié)合情況予以空間上的示蹤，從而提供遠多于傳統(tǒng)SPR 的信息。換言之，SPRM 不但以提供傳統(tǒng)SPR 獲取的信息，還可以對諸如細胞表面與藥物分子作用的異相性進行研究。正是其微米級的高分辨率使得傳統(tǒng)SPR 不能直接檢測的細菌或病毒結(jié)合過程成為可能。SPRM 特別有利于檢測藥物分子與處于活細胞中天然態(tài)的膜蛋白的相互作用。

SPRm200是世界上首臺將表面等離子體共振技術(shù)和光學(xué)顯微鏡巧妙結(jié)合為一體的生物傳感檢測儀。它為免標記研究分子相互作用的領(lǐng)域開辟一個嶄新的前沿。專門針對細胞膜蛋白和相關(guān)分子免標記檢測而設(shè)計的SPRm200，使您在不需要從細胞中提取和分離膜蛋白的前提下實時觀察細胞結(jié)構(gòu)并同時測量藥物和靶點在細胞上的結(jié)合過程。還可進行對藥物和在天然狀態(tài)下的膜蛋白之間相互作用的測量。由于出色的靈敏度和穩(wěn)定性，SPRm200能夠測量納米尺度上的結(jié)合行為，可用于研究細菌或病毒與抗菌性藥物的相互作用，以及發(fā)展新型藥物載遞納米顆粒。

活細胞上免標記生物分子結(jié)合過程的檢測

實時結(jié)合力及動力學(xué)定量測量像圖? 光學(xué)和表面等 離子體共振同時成像

藥物分子對多細胞或單細胞作用的檢測

納米尺度上分子結(jié)合過程的跟蹤檢測

SPRm 200 系統(tǒng)主要參數(shù)一覽表

典型應(yīng)用：

相比傳統(tǒng)的SPR技術(shù)只能在整體傳感區(qū)域內(nèi)（通常稱之為通道）測量平均共振角度的變化， SPRm200探測器能夠測量局部像素點上的共振角度變化并且記錄每一個像素點上的傳感曲線圖。如圖2 就顯示了SPRm200同時記錄的明視場圖和SPR像圖以及圖中任何一點或區(qū)域的傳感曲線圖。因此它能提供更多的局部信息，并且可以在自然狀態(tài)下研究膜蛋白的非均相表面結(jié)合以及它們和藥物之間的相互作用。

SPRM 圖像 – 同時的明場圖像(A) 和SPR 圖像(B).各部位的結(jié)合親和力和動力學(xué)數(shù)據(jù)可從傳感譜圖(C)中算出。

凝集素 - 糖蛋白相互作用

基本的細胞和治療過程通常開始于配體與膜蛋白的結(jié)合，并且膜蛋白在其天然狀態(tài)中的結(jié)合活性研究對于理解它們的生物學(xué)功能至關(guān)重要。這里是研究糖蛋白（膜蛋白）和凝集素（配體）之間的特異性相互作用以及單個細胞膜上的受體的結(jié)合活性和空間分布的實例。

神經(jīng)瘤細胞SHEP1在芯片上的細胞室中被孵化，然后置于SPRM樣品臺上。 將PBS緩沖液在25℃以300ul/min的流速加入細胞室。將凝集 素，80ug/ml的小麥胚芽凝集素（WGA），注入細胞室，然后用PBS緩沖液沖洗。用不同的WGA濃度（5， 10， 40， 80， 100， 200ug/ml）重復(fù)對細胞的類似測量。使用50mM GlcNAc 溶液來再生細胞表面上 的膜糖蛋白受體。用不同的WGA濃度（5， 10， 40， 80，100， 200 μg/ml）重復(fù)對細胞的進行類似測量，則可以得到如右圖所示的一系列傳感曲線圖。將每個像素的數(shù)據(jù)予以平均后，可以使用一級結(jié)合動力學(xué)模型（參見下文）推導(dǎo)出細胞不同部位上的結(jié)合動力學(xué)參數(shù)。我們儀器測量結(jié)果與以前發(fā)表的數(shù)據(jù)十分吻合[4]。

nACHRs 的結(jié)合行為的定位

nAChR膜受體在神經(jīng)傳遞和尼古丁成癮中起著關(guān)鍵作用，通常測定受體在細胞中的分布使用熒光標記的二抗。由于熒光檢測不能提供直接的動力學(xué)數(shù)據(jù)而容易導(dǎo)致假陽性的結(jié)論，SPRm200因為直接測量一抗與不含二抗的nAChR的結(jié)合，該過程不僅更加簡單，且克服了被標記的二抗所引起的不確定因素。

上圖中，工程化SH-EP1細胞在膜上表達α4β2 受體，并結(jié)合初代抗體抗α4（右圖）。通過SPR 像圖所顯示的nAChR 同其初代抗體結(jié)合的分布（粉紅色），可以明顯看出這是一個非均相的表面結(jié)合。用SH-EP1野生型細胞來作為對照， 傳感曲線右下圖A顯示了兩種類型的細胞對nAChR的反應(yīng)具有顯著差異。如傳感圖B中所示，從SH-EP1工程化細胞反應(yīng)減去野生型細胞反應(yīng)（主要出于體積折射率效應(yīng)）可以得到nAChR與其**抗體的結(jié)合動力學(xué)，它們分別為kon = 6×104/Ms，koff = 3×10-3/s 和KD=45nM。

納米顆粒檢測

SPR光源按共振角度投射到傳感器芯片上使其產(chǎn)生一個沿著金屬膜表面?zhèn)鞑サ谋砻娴入x子體(SP)波，如圖3所示。當一個納米顆粒結(jié)合到芯片表面時，它便成為SP波的散射點，因而會在SPR像中產(chǎn)生波紋圖案。其形狀遠遠大于納米顆粒的實際尺寸（100 倍以上）。這放大的波紋圖案使得SPRm200能夠檢測到粒子尺度遠小于其光學(xué)衍射的極限，通過對這個放大的波紋圖案進行跟蹤和測量，就能實現(xiàn)對分子在納米尺度下的結(jié)合行為進行監(jiān)測和研究。

在納米尺度上，由一個納米顆粒所產(chǎn)生的SPR響應(yīng)信號非常獨特。就好像把一個小石子放在一個緩緩流動的淺溪中，水面上就會產(chǎn)生一個波紋圖案（參考左圖）。 在SPR像中，這些波紋的產(chǎn)生以及其強度的變化為納米顆粒和芯片表面或和溶液中其它分子的相互作用提供了非常豐富的信息[1，5]。

細菌和抗生素

活的大腸桿菌O157:H7 在LB肉湯培養(yǎng)基中通過抗體偶聯(lián)被系在傳感器芯片上。他們因散射芯片中的SP波而在SPR像上產(chǎn)生許多點波紋如下圖右邊所示。

雖然明視場的細菌細胞像（小黑點）穩(wěn)定，SPR像中的點波紋強度有著顯著的變化。通過監(jiān)測這些波紋在納米尺度下的強度波動，可為我們提供細菌細胞的新陳代謝的重要信息。當將500μg/mL的殺菌性抗生素多粘菌素B（PMB）加入細胞室時，細菌細胞的波動急劇減弱（下右圖），從而表征細菌的死亡。